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　　 葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄(Vitis vin—ifera L.)的种子，是生产葡萄鲜食、榨汁和葡萄酒业的废弃部分。但近些年来，随着研究的不断深入，发现葡萄籽具有很高的营养价值和药用价值，其所含的有效成份原花青素(proeyanidin)具有抗氧化、清除自由基、降血脂、抗肿瘤等作用。原花青素是从葡萄籽中提取的化合物,其基本结构单位是儿茶素。原花青素中含有儿茶素单体、二聚体和三聚体,均为水溶性分子,分子中含有多个酚性羟基。多酚类化合物具有很重要的抗氧化作用[1,2],可以清除体内自由基,减少细胞膜脂质过氧化,从而降低与自由基有关的疾病的发生,延缓衰老。迄今关于原花青素清除自由基,对自由基引起的过氧化损伤的保护作用[4,5]以及由自由基引起的一系列疾病如心肌梗塞,动脉粥样硬化,药物性肝肾损伤的预防[6],和抗肿瘤、抗突变、抗辐射[12]等作用的研究屡见报道,但关于抗疲劳作用的研究尚未见报道。近年来国内外运动医学界在运动与自由基代谢方面的研究颇为活跃。研究发现运动引起骨骼肌自由基和其它形式的活性氧增加是导致骨骼肌损伤和疲劳的重要原因之一。

　　补充抗氧化剂能阻抑这种改变,提高运动能力[8]。因此我们对原花青素进行了抗疲劳实验,实验结果表明原花青素能显著延长小鼠负重游泳时间,降低疲劳鼠血乳酸含量和增加肝细胞糖元含量,从而具明显的抗疲劳作用。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　原花青素

　　1.1.2　动物　雄性健康昆明种小鼠120只,体重18~22g,购自中国药科大学动物房。

　　1.1.3　仪器　电子天平AE240,754型紫外可见光分光光度计,匀浆器。

　　1.1.4　试剂　乳酸检测试剂盒;血红蛋白测定试剂;葡萄糖标准液(均购自南京建成生物制品有限公司)。三氯乙酸、蒽酮试剂等其他试剂均为分析纯。

　　1.2　方法

　　1.2.1　剂量及分组　动物均按体重随机分成4组,每组10只。设1.7、16.7、50.0mg/kg体重三个剂量组(相当于成人推荐剂量的1、10、30倍)和一个溶剂对照组,游泳试验和各项生化试验(肝糖元、血乳酸和血红蛋白)所用动物均按体重随机分成4组,每组10只。受试物配制成所需浓度经口灌胃,连续30d。溶剂对照组给予双蒸水,小鼠灌胃量为20ml/kgb.wt.。全部动物均给予鼠全价颗粒饲料自由食用。

　　1.2.2　游泳时间测定　末次经口灌胃给予受试物30min后,置小鼠于游泳箱中,水深大于30cm,水温(25±0.5)℃,鼠尾根部负荷5%体重的铅皮,记录小鼠从游泳开始至死亡的时间,作为小鼠游泳时间(min)。

　　1.2.3　抗疲劳试验生化指标的测定　乳酸测定:末次给予受试物30min后,负重2%(体重)在30℃水中游泳60min后停止,安静15min后摘眼球采血,酶法测定血乳酸含量。肝糖原含量测定:末次给予受试物30min后,在温度为30℃水中游泳90min,立即处死,蒽酮法测定肝糖原含量。血红蛋白含量测定:末次给予受试物30min后,负重2%(体重)在30℃水中游泳60min后停止,安静15min后摘眼球采血,氰化高铁法测定血红蛋白含量。

　　1.2.4　实验数据处理　所有测值均用单因素方差分析方法和多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。

　　2　结果

　　2.1　游泳试验　由表1可见,各剂量组小鼠的游泳时间均高于对照组的值,且有剂量-反应关系,中、高剂量组小鼠的游泳时间与对照组相比有极显著差异(P<0.01)。

　　2.2　对小鼠运动后肝糖原,血红蛋白和血乳酸含量的影响

　　剧烈运动时机体对能量的需求增加,由于有氧代谢能力不足,需通过无氧酵解提供能量,同时产生大量乳酸,使肌组织中H+离子浓度升高,pH降低,引起一系列生化反应,导致疲劳的产生。而乳酸的清除需有O2的参加,由于原花青素能增加红细胞中Hb含量,血红蛋白是血液中运输O2和CO2的主要分子,血红蛋白含量增高既有利于在剧烈运动中向肌组织提供更多的氧,加强有氧代谢供能,乳酸产生减少,同时加速乳酸的清除。还能及时将肌组织中产生的CO2转运到肺排出,避免了由于pH下降造成的肌肉疲劳。这对延缓运动性疲劳的发生和加速疲劳的消除有积极作用[7]。糖原是运动中最重要的能源物质,体内糖原的水平与耐久力密切相关,糖原储备明显影响运动能力[7],糖原贮备的提高有利于机体耐力速度的提高,肌糖原储备越多,运动时间越长[11],给予小鼠原花青素后,体内糖原含量增加,可动用的糖原增加,运动后肝糖原含量下降低于对照组,耐力增加,使游泳时间显著延长,显示抗疲劳作用。

　　3 讨论

　　大量研究表明运动可以使自由基产生增加,脂质过氧化反应增强,而自由基又与一系列病理损伤有关,是导致运动性疲劳的一大原因[7,8]。补充抗氧化剂能阻抑这种改变,提高运动能力[9,10]。抗氧化剂已成为一类重要的运动营养补剂。而原花青素是良好的抗氧化剂,其抗氧化作用机理与维生素E相似[1],系由于其分子结构上存在的酚羟基能将氢原子提供给氧自由基和脂自由基,自由基本身转变为非自由基,阻断由自由基引起的生物膜上多不饱和脂肪酸的过氧化。其抗氧化能力优于VitC,VitE[4~6],具有较强的抗氧化作用,有利于活性氧的清除,使机体抗脂质过氧化作用增强,减少运动时自由基的生成及其对组织的损伤作用,有效地延缓疲劳的发生。实验表明原花青素能显著延长小鼠负重游泳时间,降低疲劳鼠血乳酸含量和增加肝细胞糖元含量,从而证明原花青素具有抗疲劳作用。其作用机制可能主要是通过清除自由基和对自由基引起的组织过氧化损伤的保护作用来实现的。